Metaloproteinasas como marcadores de progresión tumoral y futuros blancos de terapias en patologías linfoides / Metalloproteinases as markers of tumoral progression and future targets for therapies in neoplasms of lymphoid tissue

En las últimas décadas la medicina evolucionó hacia un enfoque molecular en la búsqueda de blancos específicos que permitan seguir adecuadamente la progresión de las patologías neoplásicas y desarrollar terapias exitosas. El conocimiento y comprensión de que la matriz extracelular (MEC) que rodea a un tumor influye sobre el comportamiento del mismo, reveló la importancia que cumplen las metaloproteinasas (MMPs) en la regulación de los componentes de la MEC, y por lo tanto en el desarrollo tumoral. Es por ello que actualmente se está evaluando la eficacia de inhibidores sintéticos de estas enzimas en ensayos clínicos, algunos ya en fase clínica III de investigación. También se propone que estas MMPs podrían ser utilizadas como marcadores bioquímicos, permitiendo evaluar la progresión de la enfermedad en pacientes que sufren patologías neoplásicas, e incluso dar un valor pronóstico. Es en este punto en que el laboratorio de análisis clínicos cumplirá un papel fundamental y deberá contar con los conocimientos y las herramientas necesarias para evaluar la presencia y actividad de estas enzimas. En este trabajo se expone el conocimiento actual de la estructura y funciones biológicas de las MMPs así como los antecedentes que muestran el papel que cumplen en las enfermedades neoplásicas, en especial en leucemias y linfomas

Unión diferencial de ácido hialurónico en dos sublíneas celulares CD44+. Posible implicancia en la infiltración tumoral / Differential binding of hyaluronic acid in 2 CD44+ sublines. Relationship with tumor infiltration

We have established and characterized a cell line (LBL) from a spontaneous murine T lymphoma LB. Histopathological analysis has demonstrated LB primary tumor infiltration in spleen, lymph nodes, liver, thymus, bone marrow and lung. However LBL cells infiltrated all these organs except lung. Two sublines with different growth behavior were derived from LBL cell line. One of them grew in suspension as clusters (LBLc) while the other one grew as adherent monolayers (LBLa). Growth rate, response to mitogenic stimuli and apoptosis induction were different among the parental cell line and the derived sublines. CD44 was expressed constitutively in LBL and LBLa cells. In contrast LBLc cells only expressed similar levels of this molecule when stimulated with PMA. LBLa cells showed hyaluronic acid (HA) binding properties, while LBL and LBLc cells were not able to bind HA even when activated with PMA. We postulate that differences in HA binding could be related with different infiltration behaviors.

Modulación de isoformas de la molécula de adhesión CD44 en un modelo murino de isquemia y reperfusión intestinal / Isoforms modulation of CD44 adhesion molecule in a murine model of ischemia and intestinal reperfusion

Gut ischemia-reperfusion (G-IR) induces a systemic inflammatory response, in which leukocyte contribution to this injury in distant organs is important. ICAM-1 as well as CD11/CD18 have been involved in leukocyte infiltration in liver and lungs. CD44 adhesion molecule plays an essential role in other inflammatory processes such as rheumatoid arthritis and allergic contact dermatitis, however its implication in G-IR has not been described. In order to establish a possible role of CD44 in the development of systemic inflammation by G-IR, we have studied CD44 mRNA expression by RT-PCR in a murine model of gut ischemia reperfusion. Animals subjected to G-IR showed an increased number of CD44 variable isoforms expressed in liver and spleen compared to non-treated animals or animals subjected to laparotomy. This finding indicates that G-IR specifically induces the expression of different CD44 variable isoforms. Liver CD44 upregulation in animals subjected to G-IR suggests a contribution of this molecule to lymphocyte activation and migration to this injured organ. Moreover, increased isoform expression in spleen may be induced by the proinflammatory environment resulting from a systemic depuration activity.

Neutralizacion cruzada de veneno de bothrops jararacussu por sueros antiofidicos heterologo / Cross neutralization of bothrops jararacussu venom by heterologous antivenoms

En la Argentina se utilizan tres tipos de sueros antiofídicos frete a la mordedura de crotálidos, el Anticrotálico Monovalente, contra el veneno de Crotalus durissus terrifucus ("víbora de cascabel"), el Botrópico Bivalente y el Botrópico Tetravalente ("Misiones") contra los venenos de las diferentes especies de Bothrops que se encuentran en la Argentina (las diferentes "y"rará")" Además, existe un suero Botrópico-Crotálico (Trivalente) el cual cubriria el mismo espectro que el Bivalente más el Anticrotálico. En este trabajo estudiamos la reactividad inmunoquímica de los sueros antibotrópicos Bivalente y Tetravalente, del Botrópico Crotálico (Trivalente) y del Anticrotálico Monovalente con el veneno de Bothrops jararacussu ("yararacuzú", "tapete dourado"). Además, se estudió la capacidad neutralizante de estos antivenenos sobre la potencia letal, y las actividades hemorrágica, necrotizante, procoagulante y hemolítica indirecta del veneno de B. jararacussu. La potencia neutralizante sobre las actividades biológicas y tóxicas de este veneno por todos los antivenenos utilizados es similar a la obtenida con el suero antibotrópico tetravalente (homólogo). Estos resultados sugieren la posibilidad de emplear sueros antibotrópicos heterólogos en el tratamiento de los accidentes por B. jararacussu.

Capacidad neutralizante de los sueros antiofidicos frente al veneno de Bothrops moojeni (Caisaca, Lanzadera) / Neutralizing ability of antiophidic serum against the venom of Bothrops moojeni (lance-headed viper)

La serpiente Bothrops moojeni ("caisaca", "lanzadera", "lance-headed viper") es un crotalíneo de frecuencia de aparción escasa en la Argentina. Solamente se la ha encontrado y clasificado correctamente en la provincia de Misiones. Se realizó el estudio del veneno por electroforesis en condiciones no desnaturalizantes y en SDS-PAGE y se determinó la Dosis Letal 50. La reactividad inmunoquímica frente a los antivenenos botrópicos Bivalente y Tetravalente y por el Botrópico-Crotálico producidos por el Instituto Nacional de producción de Biológicos A.N.L.I.S Dr. Carlos G. Malbrán se determinó por doble inmunoprecipitación, inmunoelectroforesis, ELISA y Western-blot. Se estudió la capacidad neutralizante de estos sueros frente a las actividades letal, hemorrágica, necrótica, proteolítica, hemolítica indirecta (fosfolipásica) y procoagulante del veneno. Estos estudios dieron como resultado un muy alto grado de reactividad inmunoquímica y de neutralización heteróloga de las diferentes actividades del veneno por los antivenenos probados. Se puede concluir que los sueros antiofídicos antibotrópicos o botrópico-crotálico, distribuídos gratuitamente a las Delegaciones Sanitarias del país por el Ministerio de Salud y Acción Social, podrían ser utilizados ante los accidentes ofídicos por Bothrops moojeni debido a que neutralizan eficientemente las actividades tóxicas del veneno de este ofidio.

Caracterizacion inmunobiologica de la leucemia murina LB y la linea celular LBC / Immunobiological characterization of the murine LB leukemia and the LBC cell line

El tumor LB se originó como una leucemia linfoide de origen espontáneo. No es inmunogénico y crece rápidamente en el huésped singeneico infiltrando hígado, bazo y ganglíos linfáticos. A partir del tumor original se obtuvo la línea en cultivo LBC, que crece en suspensión, no requiere del agregado de factores de crecimiento y presenta un número modal de cromosomas igual al patrón normal de ratón. La caracterización fenotípica de las células LB y de la línea en cultivo demostró que ambos tipos celulares están constituídos por linfocitos T, CD3-, CD25+, gp 70-, J22d.2+, que expresan antígenos del CMH de clase I pero no de clase II, CD8+, y CD4- en el tumor original pero CD4+ en la línea celular. Esta última fue capaz de inducir una respuesta inmune en el huésped singeneico, mediada por anticuerpos que reaccionaron contra componentesde peso molecular 14, 16 y 27 kDa presentes en las células tumorales y en timocitos pero no en ganglios normales, y por células citotóxicas, efectivas para retardar el tiempo de muerte de los ratones desafiados con el tumor original LB. Por ELISA se pudo comprobar la presencia de receptor soluble de IL-2 en los sueros, ascitis y sobrenadantes de células LB en cultivo, responsable del efecto inhibitorio de la proliferación tumoral. Las células fueron estimuladas por agregado de IL-2 e inhibidas en presencia de un anticuerpo monoclonal específico para IL-2, demostrando la funcionalidad del receptor. Por RT-PCR se puso en evidencia la presencia de ARNn de IL-2 en las células tumorales, confirmando que éstas sintetizan IL-2. Se realizó una triple transfección de las células LBC con los genes que codificam para las cadenas alpha y beta de las moléculas I-A(d) y el gen pSV2-Neo, que confiere resistência al antibiótico Genetecín, y se obtuvieron 3 clones positivos para I-A(d). Por inoculación de estas células se generaron linfocitos T citotóxicos que fueron efectivos para impedir o retrasar significativamente el desarrollo tumoral. En función de estos resultados postulamos que la expresión de antígenos de clase II sobre la superfície celular le confiere a la célula tumoral la capacidad para actuar como célula presentadora de antígenos, generando una respuesta anti-tumoral más eficiente.

Empleo del dot-enzimoinmunoensayo en la valoración de la proteína A de Staphylococcus aureus / Dot-immunobinding assay use in valoration of protein A from Staphylococcus aureus

Se describe un método inmunoenzimático, que, por su gran sensibilidad, permite detectar pequeñas cantidades de proteína A presente en la membrana celular de determinadas cepas de Staphylococcus aureus o la liberada en el medio de cultivo. Esta técnica del dot-enzimoinmunoensayo permite poner en evidencia concentraciones de hasta 0,115 ug.ml-1 de proteína. Comparando los resultados obtenidos con la técnica de inmunodifusión radial, se confirma su mayor sensibilidad y la posibilidad de utilizar un método específico y de fácil realización en el dosaje de proteína A.

Marcadores de superficie y factores humorales en una leucemia murina espontánea / Surface markers and humoral factors in a spontaneous murine leukemia

Se presenta un modelo de linfoma espontáneo en ratones BALB/c que por sus características es apropiado para el estudio de las interacciones entre el tumor y el sistema inmune. La caracterización de las células tumorales se realizó por FACS hecho que permitió determinar que el tumor está constituído por linfocitos T que no expresan proteínas virales gp70 en su membrana y que llevan marcadores de células colaboradoras (CD4) y supresoras (CD8). Además, expresan el receptor para IL-2 y antígenos del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I pero no de clase II. No se encuentran anticuerpos en el suero ni en el líquido ascítico de los ratones portadores del tumor (transplante síngeneico); se pudo determinar en estos fluídos la presencia de un factor supresor que inhibió la proliferación de las células tumorales in vitro sí como la respuesta linfoproliferativa a Concavalina A de esplenocitos normales. Los resultados permiten concluir que este modelo experimental puede ser utilizado para el estudio y caracterización de citoquinas que podrían ser responsables del estado de inmunosupresión que se observa en ciertos pacientes con cáncer

Lack of specifici immune response against a spontaneous mouse lymphoma

Se estudió la respuesta inmune inducida por células tumorales, o por extractos de membranas de células tumorales, y la presencia de anticuerpos en el suero de ratones portadores de tumor en un modelo murino. Se demostró la ausencia de anticuerpos en el suero de ratones portadores de tumor. Las células tratadas con Mitomicina C, los extractos de membranas tumorales (TME) y fracciones obtenidos de los mismos (fracción 2) indujeron bajos títulos de anticuerpos específicos cuando se inyectaron en huéspedes singeneicos, mientras que los homogenatos totales de tumor y otras fracciones fueron inefectivas. Los ensayos hechos "in vivo" demostraron que los anticuerpos inducidos no protegían contra las células LB vivas ya que no alteraron el crecimciento del tumor